可重复性细胞培养皿是用于细胞培养的实验室器皿,利用它作细胞实验使得在显微镜下观察更加方便、快捷。其材质基本上分为两类,主要为玻璃和塑料的。玻璃为底片的细胞培养皿常见的是铁皿,塑料制成的常见的是一次性皿。铁皿和塑料皿各有优点,铁皿清洗操作更为完整,玻璃底片清洗更加干净,而塑料皿清洗操作相对简洁,使用方便、快捷。
(组合图)
玻璃盖 上层铁环 橡胶圈 玻片 下层铁环
(各部件图)
铁皿分为五部分(如上图所示),安装顺序是按照上图所示,由右到左依次往上叠加合好,最后拧紧。
准备流程:
① 第一天:将玻片放在小烧杯里,放在超声仪器内超声30min。超声过后,用自来水清洗玻片,之后放入烘箱,等玻片烘干后,泡酸一昼夜。
② 第二天:将泡过酸的玻片先用自来水清洗20遍,再用二重水清洗15遍。将用过的培养皿拆开用绳子穿起来,玻璃片上的字用酒精棉擦拭干净。将培养皿放入超声仪器内超声30min,之后,用自来水及二重水分别清洗。将玻片及铁片、玻璃片装在一起,盛上水放在干净报纸上验漏(需一整夜)。
③ 第三天:将铁皿烘干(注意铁皿是否漏水,报纸湿润即弃用),烘干后(注意铁皿是否变松,可再拧紧)用报纸包好(铁皿玻片朝内,接触报纸端放玻璃片)灭菌,再烘干。
传细胞流程:
① 将清洗液,消化液,培养液,铁皿(紫外照过),EP管放入超净台。
② 取出培养瓶放在显微镜下观察(细胞长满且无污染的情况下),用PBS清洗两遍,加1ml(大瓶加2ml,小瓶加1ml)的消化液。细胞消化完全后,将消化液吸出,加2ml的培养液,使细胞与培养液混合均匀。
③ 将培养瓶中的液体移0.1ml加入EP管,再在EP管中加入0.4ml的培养液,混合均匀,之后将EP管中液体移入铁皿,尽量使细胞在铁皿中覆盖均匀(可在高倍显微镜下观察,不均匀时,用中枪吹匀)。
④ 用封口膜封好铁皿。在培养瓶中再加入适当培养液,混合均匀。