一体化细胞免疫荧光技术介绍
 
免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
一．传统的免疫荧光实验步骤
（一）、实验材料 
1. 细胞样品 
2. 试剂、试剂盒： 多聚甲Quan；70% 甲醇；丙Tong；PBS；Triton ；BSA；DAPI 染液；DABCO；Tris；甘油   
3. 仪器、耗材：玻片     
（二）、实验步骤     
细胞爬片免疫荧光实验步骤 
第一天：
1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次，每次 3 min；
2. 用 4% 的多聚甲Quan固定爬片 15 min， PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min；
3. 0.5%Triton X-100( PBS 配制 ) 室温通透 20 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；
4. PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干 PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭 30 min；
5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃ 孵育过夜；
第二天：
6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中 20-37℃ 孵育 1 h，PBST 浸洗切片 3 次，每次 3 min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
7. 复染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min，对标本进行染核，PBST 5 min×4 次洗去多余的 DAPI；
8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像

二 传统免疫荧光实验主要问题

1. 爬片效果欠佳
2. 细胞和试剂用量大，成本高
3. 染液分布不均
4. 操作繁琐,费时费力

三. 一体化免疫荧光技术简介 
一体化的培养室-固定-染色-成像 免疫荧光的解决方案

技术特点：
1.快速简便的样品制备,一体化培养室简化了免疫荧光染色方案
2.均匀细胞分布,通道载玻片几何结构可以产生均匀的细胞分布
3.经济实惠的实验方案，需要少量的细胞和试剂
4.高分辨率成像，适用于宽场荧光，共焦成像，FRAP-FRET-FLIM和高质量的相差成像（Phase Contrast）
 
主要工作模式：
1. 通道模式：ibidi通道载玻片是使用少量试剂的理想选择。μ-Slides VI0.4是一般免疫荧光检测的理想选择，而μ-Slide I0.4Luer可在低密度培养和流动实验中进行免疫荧光染色。

2.开放腔室模式
Ibidi μ-Slide 8 孔和μ-Dish35mm 能够在全内腔中实现标准免疫荧光方案，无盖玻片。染色后，使用高分辨率显微镜通过聚合物盖玻片底部观察样品。

 

3. 可拆卸腔室载玻片模式
带有腔室的可拆卸硅垫片为个体细胞培养和孵育提供了理想的模式。ibidi micro-Insert 4 Well可以使用极低的试剂量。可拆卸3Well|8Well|12 Well Chambers是长期样品储存的理想选择。

1. 一体化免疫荧光技术应用举例

1. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) cultured under flow conditions in μ-Slide I ^0.4 Luer

3. Differentiated mouse fibroblasts cultured on elastic surface (ESS 28 kPa)

绿色: zyxin (Alexa 488 conjugated antibody)
红色: alpha-smooth muscle actin (Cy5 conjugated antibody)